Lactobacillus leichmannii

Lactobacillus leichmannii: Una Referencia Integral

1. Identidad, Nomenclatura y Taxonomía

1.1 Nombres y Sinónimos

Lactobacillus leichmannii es una bacteria del ácido láctico (BAL) Gram-positiva, con forma de bastón, cuya historia taxonómica formal abarca más de un siglo. El organismo fue descrito originalmente como Lactobacillus leichmannii por Henneberg en 1903, con el nombre formalmente aprobado en las Listas Aprobadas de 1980 y atribuido a Bergey et al. 1923. El epíteto de la especie leichmannii honra al bacteriólogo alemán Leichmann, quien realizó trabajos pioneros sobre bacterias de fermentación a finales del siglo XIX.

La bacteria ha acumulado varios sinónimos a lo largo de su historia taxonómica. Estudios de hibridación ADN-ADN demostraron que las cepas tipo de Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus lactis, Lactobacillus leichmannii y Lactobacillus bulgaricus exhiben homologías ADN-ADN del 90–100% entre sí, lo que llevó a su clasificación como una sola especie que conserva el nombre Lactobacillus delbrueckii por prioridad. Debido a las altas similitudes fenotípicas y genotípicas entre L. delbrueckii, L. leichmannii, L. lactis y L. bulgaricus, solo L. delbrueckii se conserva como especie separada, y tanto L. lactis como L. leichmannii se tratan como L. delbrueckii subsp. lactis.

En consecuencia, el nombre válido actualmente aceptado para L. leichmannii es Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis. Esta subespecie se clasifica dentro del género Lactobacillus, familia Lactobacillaceae, orden Lactobacillales, clase Bacilli, y filo Bacillota (anteriormente Firmicutes). La sinonimia formal registrada en las principales colecciones de cultivos incluye Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis (Orla-Jensen 1919) Weiss et al. 1984, con Lactobacillus leichmannii (Henneberg 1903) Bergey et al. 1923 y Lactobacillus lactis (Orla-Jensen 1919) Bergey et al. 1934 como sinónimos subjetivos.

La reclasificación de 2020 del género Lactobacillus basada en el genoma completo consolidó aún más esta posición. Esta reclasificación refleja la posición filogenética de los microorganismos y agrupa a los lactobacilos en clados robustos con propiedades ecológicas y metabólicas compartidas, como se ejemplifica en el género Lactobacillus enmendado, que abarca especies adaptadas a vertebrados. Bajo el nuevo sistema, L. delbrueckii (y por extensión L. leichmannii) permanece dentro del género Lactobacillus enmendado y circunscrito de manera más restringida. La ATCC mantiene cepas de referencia bajo el nombre heredado: ATCC 4797 está catalogada como Lactobacillus leichmannii (Henneberg) Bergey et al., mientras que ATCC 7830 ahora está catalogada como Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis.

1.2 Características Físicas y Microbiológicas

El organismo se presenta como células Gram-positivas, con forma de bastón, que forman cadenas individuales o cortas, produciendo el isómero D(−) del ácido láctico como producto final principal de la fermentación de carbohidratos, con temperaturas óptimas de crecimiento entre 40 y 42°C (rango de 22–45°C) en entornos lácteos. Este miembro de las bacterias del ácido láctico (BAL) comprende microorganismos Gram-positivos, con forma de bastón, anaerobios facultativos y resistentes a los ácidos, que ocupan diversos entornos ricos en carbohidratos con producción final de ácido láctico derivado del metabolismo fermentativo.

El grupo L. delbrueckii es obligatoriamente homofermentativo y produce el isómero D(−) del ácido láctico a partir de una variedad de carbohidratos. Como organismo homofermentativo, los tipos homofermentativos producen ácido láctico como producto principal o único de la fermentación de glucosa, mientras que los tipos heterofermentativos producen cantidades molares iguales de ácido láctico, dióxido de carbono y etanol. Cabe destacar que Lactobacillus leichmannii (delbrueckii), que es homofermentativo, crecerá a temperaturas mucho más altas —48–50°C— que muchas otras BAL que fermentan cereales.

La morfología de las colonias es de aproximadamente 1 mm de diámetro en medios sólidos. La adenosilcobalamina se requiere como cofactor para la enzima ribonucleótido reductasa de la bacteria, responsable de la transformación de nucleósido trifosfatos en desoxinucleótidos. La arginina es un aminoácido utilizado por la bacteria para generar compuestos energéticos como el ATP.

1.3 Hábitat Natural y Fuentes

Ecológicamente, L. leichmannii se encuentra dentro de los tractos intestinales de animales. Se encuentra raramente en el vino; cuando se encuentra en el vino, sugiere contaminación de las uvas, quizás proveniente de fertilizantes. Dentro de la ecología más amplia de Lactobacillus, los lactobacilos ocupan hábitats ricos en nutrientes que pueden categorizarse en alimentos fermentados o en descomposición y alimento para animales, el entorno incluyendo la superficie de las plantas, el suelo, y el cuerpo de animales invertebrados y vertebrados.

El pariente cercano del organismo y actual portador del nombre aceptado, L. delbrueckii subsp. lactis, ha sido caracterizado más exhaustivamente en entornos lácteos. Dos de las tres subespecies del grupo L. delbrueckii son cultivos iniciadores termófilos importantes de lactobacilos en fermentaciones lácteas. La descripción original de Henneberg en 1903 se basó en aislados de masa de fermentación, leche, cerveza, levadura prensada, melaza, chucrut, pepinillos en vinagre y masa madre, según se documenta en su artículo de 1903 en Zeitschrift der Spiritusindustrie.

2. Uso Histórico y Tradicional

2.1 Orígenes de la Descripción Científica

La bacteria ahora sinonimizada con L. leichmannii estuvo entre el grupo de bacterias del ácido láctico examinadas sistemáticamente por el científico alemán de fermentación Wilhelm Henneberg en 1903. El trabajo de Henneberg de 1903 examinó las bacterias del ácido láctico de masa de destilería, leche, cerveza, levadura prensada, melaza, chucrut, pepinillos en vinagre y masa madre, publicado en Spiritusindustrie 26:329–332. Estas bacterias eran parte integral de las industrias tradicionales germánicas de fermentación de alimentos y bebidas, que habían operado empíricamente durante siglos antes de la caracterización científica. Bergey y sus colegas validaron y nombraron formalmente la especie en 1923.

2.2 Papel en los Alimentos Fermentados Tradicionales

Entre las especies que fermentan cereales, L. leichmannii (delbrueckii), que es homofermentativo, crecerá a temperaturas mucho más altas (48–50°C), lo que la distingue de la mayoría de las otras BAL involucradas en la fermentación tradicional de cereales. Este carácter termófilo hizo que los miembros del grupo L. delbrueckii —incluidas las cepas ahora clasificadas como subsp. lactis— fueran importantes en fermentaciones lácteas a alta temperatura. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (la subespecie hermana) se utiliza extensamente como cultivo iniciador para la fabricación de yogur. L. delbrueckii subsp. bulgaricus y L. delbrueckii subsp. lactis son dos de las tres lactobacilos termófilos utilizados en quesos elaborados con temperaturas de cocción elevadas.

Las bacterias del ácido láctico han participado de manera indispensable en la producción de muchos cereales y bebidas fermentadas tradicionales, étnicas, ancestrales y modernas, siendo sus aspectos funcionales el resultado de cambios moleculares significativos en los macronutrientes durante la fermentación del ácido láctico. La aplicación industrial temprana de lo que entonces se llamaba L. leichmannii fue en la producción de ácido D-láctico. El L. leichmannii ATCC 4797 puede formar dentro de 60 horas 113 g de ácido D-láctico por litro de medio nutritivo, con un nutriente que contiene glucosa o melaza de remolacha azucarera y otros aditivos habituales, lo cual era relevante en el contexto de una demanda creciente de ácido D-láctico como material de partida para síntesis químicas de compuestos ópticamente activos.

2.3 Descubrimiento de la Dependencia de la Vitamina B12

Un desarrollo fundamental en la historia científica de este organismo ocurrió a mediados del siglo XX, cuando fue reconocido como un microorganismo dependiente de la vitamina B12. Shorb (1947) observó que Lactobacillus lactis no crecería completamente en ausencia de vitamina B12. Un trabajo fundacional temprano fue publicado por Hoffmann et al., quienes informaron la respuesta de Lactobacillus leichmannii 313 al factor antianemia perniciosa en el Journal of Biological Chemistry en 1948. Este descubrimiento transformó al organismo de una simple bacteria de fermentación láctea en el reactivo biológico central para la medición cuantitativa de la vitamina B12 en alimentos y muestras clínicas —un papel que ha mantenido durante más de siete décadas.

3. Constituyentes Clave y Compuestos Activos

3.1 Dependencia de la Vitamina B12 y el Sistema de la Ribonucleótido Reductasa

La característica bioquímica definitoria de L. leichmannii que le otorga importancia científica e industrial es su requerimiento absoluto de vitamina B12 (cobalamina) para sostener la síntesis de ADN. La ribonucleótido reductasa (RNR, 76 kDa) de Lactobacillus leichmannii es una RNR de clase II que requiere adenosilcobalamina (AdoCbl) como cofactor. La ribonucleósido-trifosfato reductasa (RTPR, EC 1.17.4.2) de Lactobacillus leichmannii —una enzima monomérica que requiere adenosilcobalamina— cataliza la conversión de nucleósido trifosfatos en desoxinucleósido trifosfatos.

Esta enzima ocupa una posición central en la bioquímica de la biosíntesis de ADN. El gen de esta enzima ha sido clonado y secuenciado, y en contraste con las expectativas basadas en consideraciones mecanísticas, no existe homología de secuencia estadísticamente significativa con la reductasa de Escherichia coli, que requiere un centro dinuclear de hierro y un cofactor de radical tirosilo.

Las determinaciones del efecto isotópico indican que la ribonucleótido reductasa cataliza la escisión del enlace carbono-hidrógeno en posición 3′ de los nucleósido trifosfatos durante su reducción a desoxinucleósido trifosfatos, con la adenosilcobalamina (AdoCbl) desempeñando un papel clave como cofactor. Este mecanismo de radicales ha sido ampliamente estudiado precisamente porque la RTPR de L. leichmannii es una reductasa de clase II monomérica y más simple, en comparación con la enzima de clase I multi-subunidad que se encuentra en mamíferos y en E. coli, lo que la convierte en un sistema modelo para la enzimología mecanística.

3.2 Producción de Ácido D-Láctico

Como bacteria del ácido láctico obligatoriamente homofermentativa, L. delbrueckii (y su sinónimo L. leichmannii) produce ácido D-láctico a partir de azúcares hexosa mediante la vía de Embden-Meyerhof, exhibiendo tolerancia a los ácidos y un metabolismo fermentativo estricto. El subproducto principal de las BAL homofermentativas es de dos moléculas de ácido láctico por mol de glucosa ingerida; el rendimiento teórico es de 1 g·g⁻¹, con rendimientos experimentales que varían según el tipo de fuente de carbono utilizada.

3.3 Metabolismo de la Arginina

El organismo posee capacidad para el catabolismo de la arginina. La arginina es un aminoácido utilizado por la bacteria para producir compuestos energéticos como el ATP, con otros productos que incluyen dióxido de carbono y amoníaco. Esta vía de la arginina desiminasa (ADI) es una característica de varios géneros de BAL que permite la generación de energía en condiciones anaeróbicas y contribuye a la resistencia a los ácidos, aunque su alcance y regulación en L. leichmannii en relación con otras especies requiere una caracterización específica de la especie más detallada.

3.4 Exopolisacáridos y Bacteriocinas

Las cepas del grupo L. delbrueckii pueden producir exopolisacáridos (EPS) y bacteriocinas, y se utilizan comúnmente en la fabricación de queso. Se ha descrito que la lactocina B, una bacteriocina activa contra miembros del género Lactobacillus, tiene una actividad que incluye a L. leichmannii entre sus objetivos, lo que indica la susceptibilidad del organismo a esta clase de péptidos antimicrobianos producidos por L. acidophilus. La lactocina B actúa sobre otros miembros del género Lactobacillus, que incluyen L. bulgaricus, L. helveticus, L. lactis y L. leichmannii.

4. Evidencia Científica por Área de Uso

4.1 Química Analítica: Ensayo Microbiológico para la Vitamina B12

El uso más exhaustivamente documentado y validado a nivel regulatorio de L. leichmannii es como reactivo biológico en el ensayo microbiológico (EMB) para la vitamina B12 en alimentos, muestras clínicas y preparaciones farmacéuticas. Este es el papel principal del organismo en la ciencia y la industria.

Desarrollo Histórico: Se desarrolló en 1949 un ensayo microbiológico para la vitamina B12 utilizando Lactobacillus leichmannii (ATCC 4797), empleando un medio que contenía aminoácidos cristalinos como fuente de nitrógeno y filtrado de jugo de tomate absorbido como fuente de factores de crecimiento no identificados.

Principio Analítico: El ensayo se basa en la medición del crecimiento de un microorganismo dependiente de la vitamina B12 expuesto a muestras de vitamina B12. En el método turbidimétrico, un medio basal deficiente en vitamina B12 se suplementa con un extracto de la muestra a analizar; tras la incubación, la turbidez bacteriana —medida espectrofotométricamente— se correlaciona con el contenido de B12, típicamente en el rango de 0.1–10 ng/mL. Este enfoque explota la dependencia metabólica de la bacteria de la B12 para la síntesis de ADN a través de la activación de la ribonucleótido reductasa.

Sensibilidad: El ensayo microbiológico se ha desarrollado para la determinación de la vitamina B12 y es el método más sensible, con un rango de respuesta de 1.0 a 10.0 pg mL⁻¹. La respuesta de crecimiento de Lactobacillus delbrueckii es suficientemente sensible para cuantificar cianocobalamina a concentraciones cercanas a 1.0 pg por mililitro de medio de crecimiento del ensayo (correspondiente a menos de 0.5 μg por 100 g).

Reconocimiento Regulatorio: En el contexto de leche y fórmulas infantiles, el método microbiológico recomendado en el Codex STAN 234-1999 es el AOAC 986.23, que utiliza Lactobacillus leichmannii como microorganismo de prueba. El Método Oficial AOAC 952.20 —Cobalamina (actividad de vitamina B12) en preparaciones vitamínicas— utiliza un ensayo microbiológico con Lactobacillus delbrueckii (ATCC 7830); este método fue originalmente validado para uso en preparaciones vitamínicas, y el Grupo de Trabajo de la AOAC sobre Métodos para el Etiquetado Nutricional recomendó el procedimiento para su uso en todas las matrices alimentarias. La Farmacopea de los Estados Unidos (USP34-NF29, 2011) también hace referencia a este organismo para el ensayo de suplementos dietéticos que contienen vitaminas solubles en aceite y en agua con minerales.

Desempeño Analítico Comparativo: Se compararon métodos turbidimétricos utilizando Lactobacillus leichmannii en dos laboratorios independientes durante un período de 6 años en cuatro experimentos comparativos que cubrían cinco productos diferentes; se encontró un grado satisfactorio de concordancia (diferencia inferior al 5%) para cuatro de esos productos.

Respuesta Diferencial a las Formas de Cobalamina: El ensayo de L. delbrueckii (leichmannii) tiene una respuesta variable a diversas cobalaminas: se ha informado una respuesta de crecimiento similar para cianocobalamina, hidroxocobalamina, sulfitocobalamina, nitritocobalamina y dicianocobalamina, mientras que la adenosilcobalamina produce una respuesta mayor y la metilcobalamina una respuesta de crecimiento menor.

Limitación Conocida: El ensayo de B12 con L. delbrueckii, si bien es un método de referencia según los Métodos Oficiales de Análisis de AOAC International, presenta un inconveniente: el microorganismo también puede utilizar el conjunto de desoxirribonucleótidos presente en la muestra. Por ejemplo, la adenilcianocobamida (Pseudo-Cbl), un análogo de cobalamina comúnmente presente en los alimentos, favoreció un crecimiento similar de L. delbrueckii ATCC 7830 al de la vitamina B12, y la escasa selectividad del EMB puede resultar en una sobreestimación del 5–30%.

Métodos Automatizados: Se ha descrito un método automatizado para el ensayo microbiológico de la vitamina B12, en el que se utiliza como organismo de prueba una cepa de Lactobacillus leichmannii resistente al cloranfenicol, eliminando la necesidad de esterilización o adición aséptica. Las pruebas pueden establecerse a una tasa de 80 por hora y, tras la incubación, pueden leerse a 160 por hora.

Criopreservación de Cultivos para Uso en Ensayos: Se ha descrito un método optimizado para preparar cultivos criopreservados de Lactobacillus leichmannii para el ensayo microbiológico de la vitamina B12, que consiste en mezclar los cultivos con un volumen igual de glicerol estéril de 800 mL/L antes de la congelación. El porcentaje de recuperación de células viables tras la descongelación es más alto cuando los cultivos se encierran en aislamiento de poliestireno y se enfrían a −70°C; los cultivos criopreservados son estables durante muchos meses, ofreciendo consistencia en la forma de la curva estándar, con valores del coeficiente de variación (CV) de los sueros control que oscilan entre 2.58% y 4.82%.

4.2 Herramienta de Investigación Bioquímica: Mecanismo de la Ribonucleótido Reductasa

Más allá de su papel analítico, L. leichmannii ha sido empleado extensamente como organismo modelo en la investigación fundamental de enzimología relacionada con el mecanismo de la reducción de ribonucleótidos dependiente de radicales. Esta área de uso es puramente científica y preclínica, sin aplicación terapéutica humana directa.

La ribonucleótido reductasa (RNR) de Lactobacillus leichmannii, un monómero de 76 kDa que utiliza la adenosilcobalamina (AdoCbl) como cofactor, cataliza la conversión de nucleósido trifosfatos en desoxinucleótidos. La investigación utilizando gemcitabina (el agente quimioterapéutico 2′,2′-difluoro-2′-desoxicitidina) y su forma trifosfato (F2CTP) como inhibidores basados en el mecanismo ha revelado vías de inactivación detalladas de esta enzima. La incubación de la RTPR con un equivalente de F2CTP resultó en una pérdida del 90% de la actividad catalítica dentro de 30 segundos; el análisis de los productos después de 30 minutos reveló que la inactivación estuvo acompañada de la liberación de ambos fluoruros, la formación de 5′-desoxiadenosina a partir del cofactor de adenosilcobalamina (AdoCbl), y finalmente la unión covalente de la cobalamina a C419, una de las cisteínas ubicadas en la cara α del nucleótido.

Estos estudios con la RTPR de L. leichmannii han contribuido a la comprensión del mecanismo de acción de la gemcitabina contra la ribonucleótido reductasa, relevante para la investigación en quimioterapia contra el cáncer, aunque esto se refiere a la enzima bacteriana como sistema modelo, y no a ningún uso terapéutico de la bacteria en sí misma.

4.3 Fermentación Industrial: Producción de Ácido D-Láctico

Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 ha demostrado producir dentro de 60 horas 113 g de ácido D-láctico por litro de medio nutritivo, utilizando glucosa o melaza de remolacha azucarera y otros aditivos habituales. Esta capacidad industrial fue reconocida antes de que se resolviera por completo la taxonomía detallada del organismo, y desde entonces se ha atribuido a cepas dentro del grupo L. delbrueckii. El estereoisómero D(−) del ácido láctico producido por este grupo tiene aplicaciones industriales específicas en la síntesis de compuestos ópticamente activos y, históricamente, en la química de polímeros, aunque su isómero D es metabolizado con menos facilidad por los humanos que la forma L(+) producida por otras especies de BAL.

4.4 Uso Probiótico y de Salud Humana: Ausencia de Evidencia Clínica Directa para L. leichmannii

Es importante distinguir a L. leichmannii (ahora L. delbrueckii subsp. lactis) del amplio cuerpo de literatura probiótica relativa a otras especies de Lactobacillus. No se han identificado ensayos clínicos en humanos en la literatura revisada por pares que hayan evaluado específicamente a L. leichmannii o su nombre aceptado L. delbrueckii subsp. lactis como suplemento dietético probiótico para resultados de salud en poblaciones humanas.

La propia ATCC establece explícitamente que sus cultivos de referencia de Lactobacillus leichmannii están destinados únicamente para uso en investigación de laboratorio y no están destinados a ningún uso terapéutico animal o humano, ningún consumo humano o animal, ni a ningún uso diagnóstico.

La especie L. delbrueckii incluye principalmente dos subespecies —bulgaricus y lactis— ambas de gran importancia en productos lácteos fermentados industriales (principalmente producción de yogur y queso) y en enfoques biotherapéuticos. Sin embargo, la investigación biotherapéutica referenciada en este contexto se refiere a cepas de la subespecie en contextos generales de alimentos fermentados, no a ensayos clínicos probióticos con L. leichmannii sensu stricto.

Un ensayo clínico aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo de 2025 realizado por Baek et al. (Nutrients, publicado en octubre de 2025) investigó Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis CKDB001 (una cepa moderna derivada de la misma subespecie que L. leichmannii) en la función cognitiva. Se realizó un ensayo multicéntrico de 12 semanas, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, en 100 participantes de entre 55 y 80 años, asignados aleatoriamente para recibir la cepa (n = 50, 5.0 × 10⁹ UFC/día) o placebo (n = 50), evaluándose la eficacia y la seguridad al inicio y después de 12 semanas. Este único ensayo se refiere a una cepa específica con nombre propio, no a L. leichmannii en sí, y cualquier extrapolación a los aislados históricos de L. leichmannii debe hacerse con cautela. Los resultados no se generalizarían a L. leichmannii como tal sin datos específicos de la cepa.

Las principales especies de Lactobacillus que actualmente se consideran y estudian por sus atributos probióticos incluyen L. acidophilus, L. amylovorus, L. casei, L. crispatus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. gallinarum, L. gasseri, L. johnsonii, L. paracasei, L. plantarum, L. reuteri y L. rhamnosus. L. delbrueckii subsp. lactis (el nombre aceptado para L. leichmannii) no figura entre estas especies probióticas comúnmente investigadas en las revisiones regulatorias y científicas.

5. Sistemas Corporales y Áreas de Salud

Dada la ausencia de evidencia clínica para el uso probiótico directo en la salud, las asociaciones con sistemas corporales para L. leichmannii se enmarcan mejor en términos de sus roles científicos y analíticos, en lugar de afirmaciones de salud.

5.1 Medición del Estado de la Vitamina B12 (Diagnóstico/Analítico)

Lactobacillus leichmannii es un microorganismo dependiente de la vitamina B12 utilizado en ensayos microbiológicos para determinar los niveles de vitamina B12, tal como se recomienda en el método Codex STAN 234-1999 para leche y fórmulas infantiles. La vitamina B12 es esencial para la función neurológica, la formación de glóbulos rojos y la síntesis de ADN en humanos, y L. leichmannii es el organismo reactivo mediante el cual se ha cuantificado con precisión el contenido de B12 en alimentos, suplementos y muestras clínicas durante décadas. Su función está así indirectamente asociada con la salud hematológica, la salud neurológica y la ciencia nutricional, ya que la exactitud de las mediciones de B12 en estos dominios depende de ella.

5.2 Síntesis de ADN y Replicación Celular (Investigación Bioquímica)

A través de su ribonucleótido reductasa de clase II dependiente de adenosilcobalamina, L. leichmannii ha sido un organismo modelo fundamental para comprender la bioquímica de la biosíntesis de precursores de ADN —un proceso fundamental para todas las células en replicación. La enzima RTPR cataliza lo que se describe como el "extremo funcional" de la biosíntesis de ADN: cataliza la conversión de nucleósido trifosfatos en desoxinucleótidos, los bloques de construcción del ADN. La investigación sobre la RTPR bacteriana ha aportado a la comprensión de los mecanismos de los fármacos anticancerígenos (particularmente la gemcitabina) a nivel celular.

5.3 Contextos Gastrointestinales y de Fermentación Láctea

Dos de las tres subespecies del grupo L. delbrueckii son cultivos iniciadores termófilos importantes de lactobacilos en fermentaciones lácteas. Las cepas dentro de este grupo contribuyen a la textura y acidez de los productos lácteos fermentados. El grupo L. delbrueckii, incluida la subsp. lactis, se utiliza en fermentaciones de queso de cocción a alta temperatura. El producto final, el ácido D(−) láctico, se produce a razón de aproximadamente 18 g/kg de yogur; esta forma de ácido láctico es metabolizada con menos facilidad por los humanos que la forma L(+). Esta diferencia metabólica es una consideración relevante al evaluar productos lácteos que contienen cultivos iniciadores de BAL termófilos.

6. Formas de Dosificación y Dosis

Debido a que Lactobacillus leichmannii no está reconocido como un suplemento probiótico independiente en los marcos regulatorios ni en la literatura clínica, no existen dosis terapéuticas establecidas para humanos. Los usos documentados del organismo involucran aplicaciones analíticas e industriales:

• Ensayo microbiológico (método turbidimétrico): En el ensayo turbidimétrico de B12, un medio basal deficiente en vitamina B12 se suplementa con un extracto de la muestra a analizar; tras la incubación, la turbidez bacteriana se correlaciona con el contenido de B12, típicamente en el rango de 0.1–10 ng/mL. El inóculo bacteriano utilizado en estos ensayos es una preparación de laboratorio, no un suplemento para consumo.
• Cultivos de laboratorio criopreservados: Un método optimizado para preparar cultivos criopreservados de Lactobacillus leichmannii para el ensayo microbiológico de la vitamina B12 implica mezclar los cultivos con un volumen igual de glicerol estéril de 800 mL/L antes de la congelación.
• Fermentación industrial de ácido D-láctico: L. leichmannii ATCC 4797 puede producir dentro de 60 horas 113 g de ácido D-láctico por litro de medio nutritivo, relevante para aplicaciones de bioprocesos industriales en lugar de consumo humano.
• Subespecie relacionada en investigación clínica: En el ensayo de 2025 que utilizó la cepa relacionada L. delbrueckii subsp. lactis CKDB001, los sujetos recibieron 5.0 × 10⁹ UFC/día durante 12 semanas. Esta dosis se aplica específicamente a esa cepa con nombre propio en ese ensayo, y no puede generalizarse a L. leichmannii ATCC 4797 ni a otras cepas heredadas.

7. Consideraciones de Seguridad e Interacciones

7.1 Estatus Regulatorio como Organismo de Investigación

Las colecciones de cultivos de referencia establecen explícitamente que los productos de Lactobacillus leichmannii están destinados únicamente para uso en investigación de laboratorio y no están destinados a ningún uso terapéutico animal o humano, ningún consumo humano o animal, ni a ningún uso diagnóstico. Esto refleja el hecho de que L. leichmannii ha sido evaluado para aplicaciones analíticas e industriales, en lugar de para la suplementación probiótica en humanos.

7.2 Ácido D-Láctico y Metabolismo Humano

La forma D(−) del ácido láctico producida por L. delbrueckii (incluyendo el antiguo L. leichmannii) es metabolizada con menos facilidad por los humanos que la forma L(+). Esta diferencia metabólica tiene implicaciones de seguridad en contextos clínicos: la acidosis D-láctica, aunque rara, se ha reportado en pacientes con síndrome de intestino corto que consumen grandes cantidades de sustratos fermentables metabolizados por bacterias productoras de ácido D-láctico. No se han identificado informes específicos que vinculen a L. leichmannii con esta condición en individuos sanos que consumen cantidades dietéticas normales de productos lácteos fermentados.

7.3 Consideraciones sobre la Resistencia a Antibióticos

La investigación ha examinado marcas comercialmente disponibles de preparaciones probióticas y suplementos dietéticos que contienen Lactobacillus en busca de resistencia frente a antibióticos comúnmente administrados de diferentes clases. Los resultados de dichos estudios generan preocupación acerca de la seguridad de los lactobacilos para el consumo humano como probióticos, ya que pueden actuar como reservorios de genes de resistencia a antibióticos transferibles. Para el grupo L. delbrueckii en específico, estudios posteriores a 2020 han detectado resistencia intrínseca en cepas de L. delbrueckii subsp. lactis derivadas de alimentos a antibióticos que incluyen la tetraciclina, con una evaluación de 2024 sobre bacterias del ácido láctico que enfatiza la importancia de la vigilancia para mitigar los riesgos de transferencia horizontal de genes en productos lácteos.

7.4 Interferencia en Ensayos y Limitaciones Analíticas

Desde el punto de vista de la seguridad en el laboratorio, el principal riesgo documentado de L. leichmannii en el contexto del ensayo de vitamina B12 es analítico, no biológico. Lactobacillus delbrueckii puede utilizar análogos de la vitamina B12 —como desoxirribonucleótidos y desoxirribonucleósidos— además de cobalaminas biológicamente activas; la literatura más antigua sugiere que la dilución de los niveles de desoxirribósido (por ejemplo, timidina) por debajo de 1 μg por mililitro del medio de ensayo eliminará este efecto. No abordar esta interferencia puede llevar a una sobreestimación del contenido real de B12.

7.5 Susceptibilidad a la Inactivación Física

Los estudios en investigación de seguridad alimentaria han caracterizado la susceptibilidad de L. leichmannii a los tratamientos de descontaminación física, relevante para el uso del organismo como organismo estándar de desafío en la validación del procesamiento de alimentos. Las investigaciones sobre tratamientos combinados de ozono y campo eléctrico pulsado (CEP) contra L. leichmannii ATCC 4797 en NaCl al 0.1% mostraron que los recuentos se redujeron en 7.1 y 7.2 ciclos logarítmicos UFC/mL tras el tratamiento con CEP (20 kV/cm) y la exposición a 0.75 y 1 μg/mL de ozono, respectivamente, lo que representa una reducción de 3.5–6 ciclos logarítmicos mayor que la producida por cualquiera de los tratamientos individualmente.

8. Resumen de la Calidad de la Evidencia

A continuación se presenta una caracterización honesta del estado de la evidencia para cada dominio:

• Ensayo microbiológico para la vitamina B12: Evidencia sólida y bien validada. Los Métodos Oficiales AOAC 986.23 y 952.20, el Codex STAN 234-1999 y los métodos farmacopeicos de la USP reconocen todos a L. leichmannii (ahora catalogado como L. delbrueckii subsp. lactis ATCC 7830) como el organismo de referencia. Décadas de validación interlaboratorial respaldan su confiabilidad analítica, con limitaciones claramente documentadas respecto a la interferencia de análogos de cobalamina.
• Investigación bioquímica/mecanística (RTPR): Evidencia sólida revisada por pares a nivel molecular. La ribonucleótido reductasa dependiente de adenosilcobalamina de este organismo ha sido clonada, secuenciada, sobreexpresada y estudiada exhaustivamente como enzima modelo. Esta base de evidencia es científica, no clínica.
• Producción industrial de ácido D-láctico: Establecida a escala industrial, con rendimientos demostrados reportados en la literatura de patentes, aunque esta aplicación se refiere a bioprocesos industriales y no al uso como suplemento dietético.
• Uso probiótico/suplemento dietético en humanos: No se ha identificado evidencia clínica directa para L. leichmannii ATCC 4797 ni cepas tipo estrechamente relacionadas. El organismo no está reconocido como especie probiótica en las principales revisiones regulatorias o científicas. La investigación emergente sobre la cepa relacionada L. delbrueckii subsp. lactis CKDB001 representa evidencia preliminar de un único ensayo clínico de 2025 y no puede atribuirse a L. leichmannii sin investigación adicional específica de la cepa.

Referencias

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